За определяне на 3D структурата на протеин , първо трябва чист кристал от него. Методът на висяща капка използва спад на протеин – съдържащ разтвор , висящи от покрива с хартия . Под този висящи капка е резервоар с по-висока концентрация на сол от тази на спад. С течение на времето , водна пара напуска спад и завърши в резервоара , което води до протеин да кристализира . Всеки протеин изисква различни условия (като концентрация на сол и рН ) , а често и опити и грешки предлага единствения начин да намерите правилните conditions.Things ви е нужно
Lab палто , ръкавици и предпазни средства за очите
пипета с пипета типове
1 моларен разтвор на натриев хлорид в 0,05 моларен ацетат буфер , рН 4.7
2 мл епруветки на Епендорф ( или подобен )
Центрофуга
24 – ямкова плака
Вакуум грес в спринцовка
силиконизирани покривно
сгъстен въздух
пинцети
Clay (например глина или подобен)
50 мг /мл лизозим в 0,05 моларен ацетат буферен разтвор , рН 4.7

Покажи повече инструкции <Бразилски >
1

Сложете лаборатория предавка ( палто , ръкавици и предпазни средства за очите ) .

2

Използвайте пипета , за да добавите 1,1 мл от разтвор на натриев хлорид ( сол) и ацетат буферен разтвор в епруветка на Епендорф .

3

центрофугира затворена епруветка на Епендорф с разтвор на сол в него за около пет минути при 13,000 об . Не забравяйте да се балансира центрофугата , като поставите друг Епендорф епруветка, съдържаща 1,1 мл вода срещу и противоположна на тръбата на солен разтвор .

4

Добавя се 1 мл от разтвора на сол, за да кладенец в 24- и плоча .

5

Използвайте спринцовка с грес напълнена да поставите тънък слой грес около ръба на това добре . Внимавайте да не добавите твърде малко или твърде много. Ако добавите твърде много мазнини, греста ще се спускат в кладенеца и евентуално да съсипе вашия експеримент . Ако използвате твърде малко , кладенеца , няма да бъдат херметически затворени и вашия експеримент няма да работи. Стремете достатъчно грес , че покривното стъкло и греста образува херметично уплътнение по-късно.

6

Разточете глината с вашите ръце, за да правят четири малки топки, и ги натиснете върху четирите ъгъла на 24- ямкова плака . Те ще действат като подкрепя с цел осигуряване на корицата на плочата не влизат в контакт с покривни стъкла .

7

Използване на сгъстен въздух, за да взриви всеки праха на покривното стъкло . Дръжте покривното стъкло с чифт чисти пинсети .

8

Suck до 4 микролитра от разтвора на лизозим с пипета и се добавя този разтвор към центъра на покривното стъкло . Променете връхчета за пипети , и добавете 4 микролитра от разтвора на сол. Внимателно пипетирайте нагоре и надолу , смучене в течност след това изключване , за да се смеси разтвор на сол с разтвор на лизозим . Погрижете се да се смесват два без разпръскване на течността цял покривното стъкло .

9

Завъртете покривното стъкло върху бързо, така че течността да не се плъзга и растенията го категорично на върха на кладенеца. Грижете се внимателно, за да натиснете върху него, така че образува херметично уплътнение с грес всички около ръбовете на кладенеца.

10

Push корицата на 24 – и плоча върху глинени топки , и се оставя табелата на хладно място .