Потенциал на водород, или рН , е мярка за киселинността или алкалността на течност. Това е важно в много области , включително биология , химия и науки за околната среда . Измерване на рН е просто в повечето ситуации. Лакмусова хартия може да бъде поставена в течността , и промяната на цвета на хартията определя степента, до която течност е киселина или основа . В случаите, когато течността ще се изследва в клетка , други методи трябва да бъде devised.Things Ще трябва
2 ‘, 7’ – бис – ( 2 = карбоксиетил ) -5 ( и -6 ) – карбоксифлуоресцеин ( BCECF ) , или друго вещество, което е различна флуоресценция при различни условия на рН
флуоресцентен спектрофотометър с двойни monochromators , или подобен инструмент за измерване на флуоресценция
Центрофуга е. Предварително определен калибровъчни криви за измерване съответствието на вътреклетъчния BCECF и ​​цитоплазмена рН <Бразилски >
Показване повече инструкции в
1

охлади температурата на пробата клетка до 41 до 50 градуса по Фаренхайт. Това дава възможност за по-добра усвояемост на флуоресцентен материал от клетките .

2

клетъчната проба Заредете с флуоресценция се предизвиква от субстанция като BCECF . Това се извършва чрез прибавяне на BCECF на клетъчната среда , след това разбъркване на сместа внимателно в продължение на 2.5 часа. The BCECF се абсорбира през пропусклива мембрана на клетките.

3

Разделете клетките от средата и всяка неабсорбираният BCECF чрез провеждане на пробата през центрофуга . Сложете клетките в отделен контейнер.

4

клетъчната проба се нагрява до 98,6 градуса по Фаренхайт за 30 минути, за да се сближат условията в човешкото тяло. Ако клетките в процес на разглеждане , обикновено живеят в някаква друга среда, от човешкото тяло , адаптиране на извадката към подходящата температура .

5

клетъчната проба Excite чрез разбъркване. Това помага за увеличаване на флуоресцентната активност .

6

Мярка флуоресцентна интензивност на клетъчната проба с помощта на спектрофотометър . За най-добри резултати, използвайте възбуждаща светлина с дължина на вълната от 500-510 нанометра. В тези дължини на вълните , има по-голям обхват на флуоресцентна интензивност , така че е лесно да се направи разграничение на резултатите . Интензивността на флуоресценция се измерва в относителни флуоресцентни единици ( RFU ) , а съотношението на яркостта на веществото с развълнуван , флуоресцентна състояние да му нормален, спокоен глас състояние. Колкото по-висока RFU , толкова по-ярко на веществото , в сравнение с нормалното си състояние .

7

Сравни резултати спектрофотометър предварително изготвен калибровъчни криви . Като цяло , по-висока флуоресцентна означава по-високо рН в пробата . С дължина на вълната на възбуждане 510 нм , вещество с рН 6.4 ще покаже RFU от около 20 , а вещество с рН 9.9 ще покаже RFU от около 55 .