колони гел филтрация се използват за разделяне на протеини от сложни смеси . Тъй като всеки протеин има уникален молекулно тегло , те могат да бъдат въведени за разделяне в отделни слоеве от тях мигрират чрез филтруване колона, съдържаща матрица, равномерно разпределени гел . За да се идентифицират правилно всеки протеин, който се отделя , ще трябва да се калибрира колоните с помощта на няколко протеини от известни молекулни weight.Things ви е нужно
Карбоанхидразата
Цитохром C
Aprotinin
Basal сол <Бразилски> Центрофужни епруветки
Ferritin
Центрофуга
Pipet изпомпват
250 мл градуиран цилиндър
Buffer течност
Scientific почистване кърпички
спринцовка

Покажи повече инструкции <Бразилски>
1

шишенцата се отстраняват на карбоанхидраза , цитохром C и апротинин от хладилника или фризера и ги оставете да достигне стайна температура. Добавя се 4 мг на всеки протеин в центрофужна епруветка на милилитър от гел в колоната филтруване . Добави 961 мкл на базалната сол на милиграм протеин за всяка центрофужна епруветка за разтваряне на протеини. Добави 39,2 мкл на феритин на милилитър гел за всяка тръба и след това се смесват в центрофуга .

2

Изключете помпата за филтрация колона и затворете спирателния кран на входа на колоната. Развийте , но не махайте , на върха на колоната за филтрация. Поставете помпата на максималния дебит за колоната и рестартирайте помпата докато буфер материал е била източена . Спрете помпата .

3

Добавя се 1 мл на всеки протеин в колоната за филтрация с помощта на пипета помпа. Капково протеините във вътрешността на колоната от височина от 1 cm до 2 см, работа около вътрешния край на колоната . Оставете сместа на протеини, за да се установят на върха на матрицата на гел.

4

Поставете изходната тръбата на помпата в чиста, суха 250 -милилитрова мерителна цилиндър . Рестартирайте помпата в размер на 0,30 мл на минута и тичам протеините в матрицата на гел. Докато помпата работи , изплакнете стените на тръбата , като се използва пипета помпата и малко количество буфер течност. След като протеините са напълно въведени матрица гел , да се намали скоростта на помпата до 0,02 мл на минута и се изпомпва в 5 см до 7 cm слой от буфер течност на върха на матрицата.

5

Изключете колона капачка от спирателния кран. Почистете капачката на колона и на вътрешността на колоната при използване на научни почистващи кърпички . Поставете отново капачката на колоната. Напълнете резервоара за буфер с буфер течност. Прикрепете спринцовката към спирателния кран и да го отворите . Използвайте спринцовката да се направи малко количество буфер през тръбата и в спринцовката. Затворете спирателния кран и го поставете обратно към горната част на колоната . Отворете спирателния кран и проверете за течове.

6

Стартирайте колоната 0,02 мл на минута в продължение на няколко дни , докато групата на феритин наближаването на края на колоната. Съберете всички филтрация гел , който се изпомпва в разграфения цилиндър .