ТОРО клониране е процес на клониране , който използва , обикновено , 3 „А остатъци, които са термодинамично нестабилни и ги комбинира с Taq ДНК полимераза. В допълнение , методът използва пресен продукт полимеразна верижна реакция ( PCR ), които трябва да се съхранява при 4 градуса Целзий . Тази форма на клониране оптимизира активното топоизомераза I молекула добавя към края на линеен вектор . За да изпълните TOPO клониране , определен протокол трябва да бъдат следвани. Подготовка

могат да бъдат предприети някои основни стъпки, за да се ускори пълната TOPO клониране процес и ще се гарантира неговия успех. Първо, тръби от жизнеспособни клетки трябва да бъдат поставени върху лед, за да се запази тяхната приемливост. След това, супер оптимална култура ( SOC ) среда , бактериален растеж обогатен с хранителни вещества , трябва да се довежда до стайна температура . Селективните плочите след това трябва да бъде предварително затоплена до 37 градуса по Целзий , така че те са напълно готови, когато дойде време да ги използвате.

Комбинирането Съставки

да започне клонирането процес , комбинация на 2 микролитра на полимеразна верижна реакция ( PCR ) продукт , 0,5 микролитра от разтвор на натриев хлорид , и 0.5 микролитра на вектор за клониране трябва да бъде комбинирано в центрофужна епруветка 0,5 – милилитър . Веднъж комбинирани, двата компонента трябва да се определя при стайна температура и се оставя да се инкубира в продължение на пет до десет минути . След това комбинираните съставки ще бъдат добавени към “ Топ 10 химически компетентни клетки “ в 50 микролитра тръба и се поставят върху лед за още десет минути. След това , клетките трябва да се топлина в шок при 42 градуса по Целзий точно и се поставят върху лед за допълнителни минути преди да се добави 180 микролитра среда SOC . Тази смес трябва да се разклаща в хоризонтално направление, при 200 оборота в минута за още един час при 37 градуса по Целзий.