реагент Сангър се използва, за да помогне да се определи последователността на аминокиселините , които изграждат пептид . Реагентът ще се залепи – или етикет – аминокиселината в самия край на пептидна верига , известен също като N – края . Пептидът може да бъде разделен на части ( хидролизира ) и отделните аминокиселини изследвани чрез различни хроматографски методи . Независимо от амино киселина носи етикет е този, в края . Реагент Sanger е известен също като динитрофлуоробензен ( DNFB ) . След като веднъж е пристрастяват в амино киселина , тя е посочена като DNP – compound.Things ви е нужно
Laboratory мащаб
Ръкавици
Предпазни очила
Центрофужни
Центрофужни епруветки
Пастьор пипети
дестилирана вода
4,2% разтвор на натриев бикарбонат
Сангър е Reagent ( FDNB )
рН хартия
диетил етер
6М разтвор на солна киселина
Ацетон
Test тръба на MarketBook.bg Покажи повече инструкции
е. 1

Претеглят се 3 Милиграма пептид по десетобалната система . Поставете го в центрофужна епруветка . Прибавя се около 0,3 мл вода , 0,3 мл реагент Sanger и 0.075 мл натриев бикарбонат .

2

Оставя центрофужна епруветка да се инкубира при стайна температура в продължение на един час. По време на инкубирането , разклатете епруветката внимателно, за да се предотврати смес от отделяне . Проверява се рН на разтвора на всеки 15 минути с рН хартия . РН трябва да се поддържа над 9 . Ако тя започва да се откажа , добавете малко количество натриев бикарбонат (приблизително една капка се с пипета Pasteur ) .

3

След инкубацията , добави 1.5 мл вода и равно количество етер. Разтворът се оставя да се раздели на слоеве . Може да се наложи да се центрофугира сместа да го разделят. Извадете етер слой ( на върха, жълт слой ) с пипета и я изхвърлете.

4

Коригира се рН до 1.0 чрез бавно добавяне на солна киселина. Добавете малко киселина в даден момент , разбърква се леко , след проверка на рН с рН хартия . Като цяло , той трябва да изисква около 0,15 мл от киселина. Ако рН е под 1,0 , добавете малко количество ( не повече от една капка) на натриев бикарбонат.

5

Добавете 3 мл етер. Сместа се оставя да се разделят. Сега най-горния слой ( жълто, етер слой ) съдържа вашия DNP – съединение. С помощта на пипета внимателно се извлича този слой и го прехвърлете в епруветка чист. Поставете епруветката настрана и течността се оставя да се изпари , оставяйки след себе си суха, жълто вещество .

6

Измийте си твърд с ацетон. Добавете 0,3 mililiters ацетон , се разбърква леко и се екстрахира течността с пипета . Добавете 0.75 mililiters на киселина в епруветката . Вашият пептид сега е маркирана и е готов да се хидролизира и анализирани с метода на хроматография по ваш избор.