Глутатионът , или GSH , е несъществен трипептид направена от цистеин , глутамат и глицин . Той е мощен антиоксидант, който защитава клетките и органите на тялото от вредното въздействие на ROS , или реактивни кислородни видове , които са образувани от молекулен кислород в резултат на различни метаболитни процеси в организма . Антиоксидантите , като глутатион , неутрализиране на РОС и не им позволяват да взаимодейства с и увреждане на ДНК и протеин в клетките ви . Съотношението на окислена и редуцирана форма на GSH в тялото си е показателно за ROS , свързани с оксидативния стрес във вашите body.Things ви е нужно
Syringe
Butterfly игла
Центрофуга
натриев хепарин <Бразилски > Фризер
Sulfosalicylic киселина е. GSH реакция Agent
Microplate
Light източник GSH стандартен разтвор на MarketBook.bg Покажи повече инструкции
е. 1

Draw приблизително 2 мл кръв от вената на anticubetal вената с 23 – калибър пеперуда прикрепена игла за спринцовка 5 мл . Добави пробата за тестване епруветки, съдържащи натриев хепарин и внимателно обърнете тръбата за смесване .

2

Събиране на червени кръвни клетки чрез центрофугиране на пробата при 2500 оборота в минута в продължение на пет минути. Замразете и размрази пробата три пъти, за да се прекъсне клетките. Центрофугирайте разтвор клетъчен лизат в продължение на 10 минути при 12 000 оборота в минута и 4 градуса , и супернатантът се събира .

3

Премахване на протеина от пробата чрез добавяне на 5% сулфосалицилова киселина и центрофугиране на пробата при 12 000 оборота в минута в продължение на пет минути при 4 градуса. Съхранявайте депротеинизирани супернатанта при -112 градуса.

4

Смесете откриване агент тиол , GSH редуктаза , никотинамид аденин динуклеотид фосфат и буфер за анализ , в пропорции, посочени от производителя на комплекта за да направи GSH реакционната смес . Размерът на всяко химично вещество, зависи от броя на тестовете , които възнамерявате да извършите. На GSH реакционната смес се разрежда в 5 процента сулфосалицилова киселина да се концентрации от 16 , 32 , 63 , 125 , 250 и 500 микролитра .

5

Добави 1 до 10 микролитра на депротеинизирани кръвна проба на в ямките на микроплаки . Добави серийно разреден стандартен разтвор на GSH , който е наличен в комплекта за тестване, към всяка ямка за привеждане на общия обем на всяка ямка на 10 микролитра .

6

Добавете 90 микролитра от GSH реакционна смес , които сте направили в Етап 4 на всяка ямка в микроплаката . Смесете реагент чрез разклащане на плаката за 30 секунди.

7

Измерва се абсорбцията веднага чрез поставяне на плоча под светлината с дължина на вълната от 405 и 415 нанометра. Плочата се инкубира в продължение на 30 минути . Вземете абсорбцията след всеки пет минути през инкубацията .

8

Разреждат 6 милимола на преработения пробата с 5 на сто сулфосалицилова киселина и трифлуорометан сулфонат решение. Това ще премахне всички намалената GSH от разтвора. Добавете 1 до 10 micoliters от този разтвор в ямките на микроплака и повторете стъпки 5 , 6 и 7 . Това ще помогне да се оцени размерът на окислява GSH в пробата.

9

Построява се абсорбцията и пробата концентрации на графика, за да се получи кривата GSH както намалява и окислен глутатион . Изчислява се съотношението между двете форми на GSH . Повишени нива на оксидативен нива на GSH показват, оксидативен стрес и ROS .