Plant органичната материя е съставена от много клетки , всяка от които съдържа ДНК, която притежава инструкциите за растеж и функция. Учените могат да желаят да учат , изцяло или частично на генетичен материал , присъстващ в клетките , и така трябва да безопасно извличане на ДНК от структурен материал и клетъчна машината , която обгражда it.Things ви е нужно
2гр листа
чукало и хаван
Центрофуга
Водна
Balance
Марли
Six 15ml Центрофуга тръби
One 1.5ml Eppendorf тръба
100ml CTAB екстракционен буфер
2ml Beta – меркаптоетанол <Бразилски > 7 ml 24 : 1 хлороформ: изоамилов алкохол смес
50 микролитра от РНКаза а в концентрация от 10 mg /мл
пипети
6 ml изопропанол
2 ml 70% етанол
1ml стерилна дейонизирана вода

Показване повече инструкции

1

Fill на водна баня до препоръчаното ниво с вода, която варира в зависимост от спецификациите на всеки производител , и да го включите . Задаване на водна баня до 65 градуса по Целзий и се оставя да дойде до температура. Поставете контейнера изопропанол върху лед . Задайте центрофуга при 3000 оборота в минута при температура от 20 градуса по Целзий.

2

претеглят 2 г листа на баланс и ги поставете в хаванче . Добави достатъчно бета – меркаптоетанол чрез пипета към контейнера на екстракционен буфер , така че крайният продукт се състои с един до два процента от бета – меркаптоетанол . Например, ако имате обем на буфера , който измерва около 100 ml, след това се добавят 2 мл бета- меркаптоетанол към съда, и се разбърква старателно .

3

Пипетирайте 7 мл екстракционен буфер в хавана . Смаже сместа в хомогенна течност с чукалото .

4

Fold парче тензух над да образуват четири слоя . Прецедете и изстискайте течността през слоевете в 15 -милилитрова епруветка за центрофугиране .

5

Поставете епруветката на водна баня за 60 мин 30to нология . Разклатете епруветката да се смесват съдържанието на всеки четвърт час. Оставете тръба да се охлади до стайна температура след пълния период от време изтече.

6

началото на тръбата с хлороформ и изоамилов алкохол смес (това съдържа 24 части хлороформ една част изоамилалкохол ) , така че епруветка съдържа приблизително половината от пробата и половина новата течност добавянето . Капачката и я завъртете главата надолу няколко пъти бавно, така миксове на флуида .

7

Поставете тръбата в центрофугата и го оставете да се върти в продължение на 10 минути.

8

място 50 мл РНКза A в нова центрофужна епруветка . Пипета супернатантата ( ясно слой в горната част на тръбата над бял слой на остатъци ) в първата тръба и я премести към втората тръба . Капачката на епруветката и я обърнете няколко пъти, за да се смеси съдържанието заедно. Съхранявайте тубата при стайна температура в продължение на един час.

9

Изпълнете стъпки 6 и 7 отново два пъти , така че имате ясна епруветка . След това пипетирайте до 9 мл на бистрата течност от крайната тръба в нова епруветка . Добави 6 мл изопропанол и обърнете тръби 10 пъти в лек начин , така че ДНК пада на разтвор и в твърда форма . След това се центрофугира на тръба в продължение на 10 минути, който следва да създаде пелети на ДНК в долната част на тръбата .

10

излива течността в тръбата , така че остава утайка . Прехвърля се с пипета в 2 мл 70% етанол и се поставя обратно в центрофуга в продължение на пет минути. Излива течната част отново. Използвайте върха на стерилна пипета да вземете утайката и да го преместите в стерилен 1,5 -милилитрова епруветка на Епендорф . Прехвърля се с пипета в 200 микролитра стерилна дейонизирана вода и я оставете на ДНК се разтвори напълно в течността , което може да отнеме цяла нощ . След това пробата е готов за анализ.