Един от най-разпространените методи за изчисляване на концентрация на протеин в лабораторни условия е да се използва за анализ Bradford . Брадфорд реагент е колориметричен реагент, който променя цвета на базата на концентрация на протеин . Чрез комбиниране на известна стандартна крива с Bradford реагент , можете да създадете една мярка , срещу които може да се изчисли концентрацията на протеин , включително antibodies.Things ви е нужно
очистена антитяло в известен буфер
Buffer , отговаряща на окачване на антитялото
Lyophilized говежди серумен албумин (BSA ) bulgarian Microcentrifge тръби
Laboratory писалка
Вортексер
Laboratory мащаб
тегло хартия
1 ml пипета
Bradford реагент <Бразилски > Multi – добре плоча
Colorimetric плоча четец
Microsoft Excel
Lab книга
Pen

Покажи повече инструкции
Създаване на Standard MarketBook.bg: 1

Мярка 200 мг на BSA на тегло хартия с помощта на лабораторен мащаб . Го включвате в микроцентрофужна епруветка . Добавят се 2 мл буфер на микроцентрофужна епруветка , съдържаща 200 мг от BSA . Обозначете тази тръба “ 1 “

2

Vortex Tube 1 до BSA се разтвори напълно.

3

Отстрани 500 ул на BSA в буфер и трансфер да втора тръба . Обозначете тази тръба “ 2 “ Добавете 500 ул на обикновен буфер, за да Tube 2.

4

Отстрани 200 ул на BSA в буфер от Tube един и да го прехвърля на нова тръба. Обозначете тази тръба “ 3 “ Добавете 800 мкл от обикновен буфер, за да Tube 3

5

Отстрани 100 ул на BSA в буфер от Tube един и да го прехвърля на нова тръба. Обозначете тази тръба “ 4″ Прибавят се 900 мкл от обикновен буфер, за да Tube 4.

6

Отделят се 10 мкл от BSA в буфер от Tube един и да го прехвърля на нова тръба. Обозначете тази тръба “ 5 “ Добавете 990 ул на обикновен буфер, за да Tube 5. Tubes 1- 5 съдържат степенувани стандартна серия . Първата тръба има известна концентрация от 100 мг /мл ; Второто , 50 мг /мл ; третата , 20 мг /мл , на четвърто място, 10 мг /мл ; и пето , 1 мг /мл. Всяка епруветка съдържа приблизително 1 мл разтвор.

Създаване на антитела Разреждането

7

Добавяне на 5 0ul на пречистено антитяло до 95 0ul на буфер. Обозначете тази тръба „A. “

8

Добавяне на 10 ул пречистена антитела към 990 мкл буфер. Обозначете тази тръба „Б. “

9

Добавят се 2 ул пречистена антитела към 998 мкл буфер. Обозначете тази тръба „В. “

Заредете плоча на MarketBook.bg: 10

Сложи 0.5 мл обикновен буфер в първите кладенци в две колони на многокладенчови плоча .

11 <​​р > Сложи 0,5 мл от съдържанието на Tube 1 в секунда изворите на първите две колони в многокладенчови плоча . Продължете надолу по степен серия докато първите две колони съдържат 0.5 мл една BSA стандартен разтвор от всяка от Tubes 5.1 , включително кладенци за обикновен буфер.

12

Добавяне 0,5 мл Bradford Reagent на всеки добре . Завъртете плаката да се смесват реагента с белтъчни разтвори , като внимавате да не разлеете съдържанието на всеки от кладенците . Изчакайте 5 минути. MarketBook.bg: 13

Прочети табелата в съответствие с протокола , специфична за вашата чиния четец при дължина на вълната 595 нанометра .

Изчисли антитяло Концентрация
<Бразилски > 14

Копиране на стойностите, отчетени от читателя плоча в Microsoft Excel.

15

Създаване на графика от две колони на ценности , представляващи стандарт BSA с помощта на помощника за диаграми в Microsoft Excel. <Бразилски >
16

Парцел точките , измерени от разреждания на антителата в графиката Excel. Прочетете съответната концентрация на протеин в зависимост от стойността на Y – ос за точката за разреждане на антитела на графиката Excel.

17

В зависимост от това дали сте с помощта на стойностите, получени от Tube A, B или C , умножете стойността от която 20 , 40 или 500, съответно . Получената стойност е концентрацията на вашето пречистено антитяло .